狂犬病毒检测抗体检测方法介绍

        狂犬病毒检测抗体检测分为特异性抗体检测和中和抗体检测，介绍如下：

A. 特异性抗体检测：

在自然感染情况下，狂犬病毒通常由被疯动物咬伤时通过其带有病毒的唾液进入机体伤口内，在入侵部位狂犬病毒基本上不增殖，一般也不侵入血流，故不能形成病毒血症。因此，在感染后的一段时间内狂犬病毒或其抗原不能与机体免疫系统广泛接触，不能有效刺激机体产生抗狂犬病毒感染的免疫应答反应。狂犬病的晚期因血脑屏障作用被破坏，脑内大量病毒抗原得以进入血流，可以刺激机体的免疫系统产生大量特异性抗体。因此，许多狂犬病人在发病早期血清中查不到抗体或抗体滴度很低，狂犬病特异性抗体只在临床疾病的晚期出现。 

B. 中和抗体检测：

狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体水平是测定疫苗免疫力程度的评判指标，WHO 狂犬病专家委员会认为中和抗体水平等于或高于 0.5IU/ml 血清，表示能得到有效的保护。

狂犬病毒中和抗体的检测可以用传统的小鼠中和试验或 WHO 推荐的快速荧光灶抑制试验（RFFIT）。RFFIT 试验时倍比稀释已经灭活的血清样品，同时设阴、阳性血清对照。病毒用标准固定毒 CVS 株，细胞用 BHK21 细胞系。

首先将稀释的被检及对照血清 0.1ml 加入 96 孔细胞培养板中，再在各血清孔中加入 0.1 m1 标准病毒稀释液（100TCID50），37℃中和1.5 小时；

然后每孔加入细胞，37℃、5% C02 培养过夜后弃掉培养液，PBS 洗一次，丙酮固定。

干燥后，加荧光素标记的抗狂犬病毒抗体，37℃ 30 分钟，PBS 洗 3 次，荧光显微镜观察结果：比较实验组和阴性血清组的荧光灶，实验组中能使荧光灶抑制≥50％的血清最高稀释倍数，即为被检血清的中和抗体滴度。

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